Az izomerő vizsgálatához használt viselkedési tesztek

Az izomerő vizsgálatához használt viselkedési tesztek

Kísérletsorozatunkat az élő állatok viselkedésének és izomerejének tanulmányozásával kezdjük. Ennek során futtatómalommal mérjük az állatok futásteljesítményét, valamint grip-teszttel és függeszkedési teszttel vizsgáljuk az állatok kapaszkodása során kifejtett erejét.

Futtatómalom

Az állatokat önkéntes futtatómalommal (Lafayette Instruments) ellátott ketrecbe helyezzük egyesével, melyben ad libitum táplálékhoz és vízhez is hozzáférnek. A kísérleteket 12/12 órás fény/sötét megvilágítás mellett végezzük szobahőmérsékleten. Háromnapos hozzászokatást követően CB1 KO és vad típusú C57BL/6 vonalból származó egerek mozgási szokásait figyeljük meg. Mérjük a megtett távot, futási sebességet és az egy nap alatt a malomban eltöltött időt. A kerék számítógéppel van összekötve, az adatok 10 perces intervallumonként kerülnek rögzítésre, 14 napon keresztül folyamatosan.

http://www.lafayetteneuroscience.com/product_detail.asp?itemid=980

 












A kutatás az Európai Unió és Magyarország támogatásával, az Európai Szociális Alap társfinanszírozásával a TÁMOP 4.2.4.A/2-11-1-2012-0001 azonosító számú „Nemzeti Kiválóság Program – Hazai hallgatói, illetve kutatói személyi támogatást biztosító rendszer kidolgozása és működtetése országos program” című kiemelt projekt keretei között valósult meg.

C2C12 sejtvonal

C2C12 sejtvonal

A C2C12 a Yaffe és mtsai. által 1977-ben létrehozott egér vázizom eredetű myoblast sejtvonal egyik szubklónja (Yaffe & Saxel 1977, Blau et al. 1983). A sejtek a felnőtt C3H egértörzs lábának harántcsíkolt izomzatából nyert immortalizált myoblastok, melyek lószérum hatására myotubulusokat képeznek. A differenciáltatást 90%-os sejtsűrűségnél kell megkezdeni, ugyanis ezen mértékű denzitás biztosítja a sejtfúziót megelőző sejt-sejt interakció meglétét.

A myoblast tenyészet fenntartásához és a proliferációjuk elősegítéséhez a DMEM tápoldatot 10% FBS-sel, 50 U/ml penicillinnel, és 50 µg/ml streptomycinnel egészítjük ki. A kísérleteinkhez a tenyészetet izomcsövekké differenciáltatjuk, miután elérték az ehhez szükséges 80-90%-os konfluenciát. A differenciálódás elindítása a tápoldat összetételének módosításával történik, melynek során a 10% FBS-t – a többi összetevőt nem változtatva – 5% lószérumra (HS) cseréljük. A kísérleteket 5-6 napos differenciált myotubulusokon végezzük (Oláh et al. 2011).

 6 napos, terminálisan differenciálódott C2C12 myotubulusok

Irodalom:

Blau HM, Chiu CP, Webster C: Cell. 1983 Apr;32(4):1171-80.

Oláh T, Fodor J, Ruzsnavszky O, Vincze J, Berbey C, Allard B, Csernoch L: Cell Calcium. 2011 Jun;49(6):415-25.

Yaffe D, Saxel O: Nature. 1977 Dec 22-29;270(5639):725-7.






A kutatás az Európai Unió és Magyarország támogatásával, az Európai Szociális Alap társfinanszírozásával a TÁMOP 4.2.4.A/2-11-1-2012-0001 azonosító számú „Nemzeti Kiválóság Program – Hazai hallgatói, illetve kutatói személyi támogatást biztosító rendszer kidolgozása és működtetése országos program” című kiemelt projekt keretei között valósult meg.

CB1-KO egerek

CB1-KO egerek

A CB1 kannabinoid receptorok funkciójának vizsgálatához Zimmer és munkatársai (Zimmer et al. 1999) létrehoztak egy sérült CB1 génnel rendelkező egértörzset. A CB1 receptor kódoló szekvenciáját egyetlen nagy exon tartalmazza. A CB1 receptor hiányos egerek létrehozásakor Zimmer és munkatársai PGK-neo-ra cserélték a CB1 kódoló szekvenciájának nagy részét (a 32-448. aminosavak közötti részt), embrionális őssejtek homológ rekombinációja segítségével.

A CB1 knockout (CB1-KO) egerek egészségesnek és szaporodóképesnek mutatkoztak, azonban szignifikánsan nagyobb volt a mortalitásuk a kontroll C57BL/6 egerekhez képest. Ezen felül csökkent lokomotoros aktivitást, megnövekedett gyűrű-katalepsziát, valamint a hot-plate tesztekben és formalin-tesztekben hipoalgéziát mutattak (Zimmer et al. 1999).

Irodalom:

Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI: Proc Natl Acad Sci U S A. 1999 May 11;96(10):5780-5.






A kutatás az Európai Unió és Magyarország támogatásával, az Európai Szociális Alap társfinanszírozásával a TÁMOP 4.2.4.A/2-11-1-2012-0001 azonosító számú „Nemzeti Kiválóság Program – Hazai hallgatói, illetve kutatói személyi támogatást biztosító rendszer kidolgozása és működtetése országos program” című kiemelt projekt keretei között valósult meg.

C57BL/6 kontroll egerek

Az irodalmi háttér áttekintése után, a következő blogbejegyzéseimben a kutatásom során használt kísérleti állatokról, mérőrendszerekről és módszerekről fogok írni.

C57BL/6 kontroll egerek

A C57BL/6 egértörzs, amit gyakran neveznek „C57 black 6”-nek, „C57”-nek, vagy „black 6”-nek, az utóbbi 80 év legszélesebb körben használt laboratóriumi egértörzse. A beltenyésztett C57BL egereket 1921-ben fejlesztette ki C. C. Little, aki a Miss Abbie Lathrop készletéből származó 57-es számú nőstényt keresztezte az 52-es számú hímmel. Az így született 10 altörzs közül a 6-os altörzs volt a legnépszerűbb. A genetikailag módosított egértörzsekhez leggyakrabban ezt a törzset használják genetikai háttérként. Népszerűsége annak is köszönhető, hogy jól szaporítható, hosszú életű, és kevéssé hajlamos a tumorképzésre. A C57BL/6 egereknek sötétbarna, majdnem fekete szőrzete van. Érzékenyebbek a zajra, és hajlamosabbak a harapásra is, mint a szelídebb laboratóriumi egértörzsek, pl. a BALB/c. A C57BL/6 egértörzs volt a második olyan emlősfaj, aminek a teljes genomját publikálták. Kutatásunk során az itt felsorolt jó tulajdonságai mellett azért ezt az egértörzset használtuk, mert ez képezi a genetikai hátterét a Zimmer és munkatársai által kifejlesztett CB1-KO egértörzsnek (Zimmer et al. 1999).

Irodalom:

http://jaxmice.jax.org/strain/000664.html

http://www.criver.com/products-services/basic-research/find-a-model/c57bl-6n-mouse

http://en.wikipedia.org/wiki/C57BL/6

Zimmer A, Zimmer AM, Hohmann AG, Herkenham M, Bonner TI: Proc Natl Acad Sci U S A. 1999 May 11;96(10):5780-5.  






A kutatás az Európai Unió és Magyarország támogatásával, az Európai Szociális Alap társfinanszírozásával a TÁMOP 4.2.4.A/2-11-1-2012-0001 azonosító számú „Nemzeti Kiválóság Program – Hazai hallgatói, illetve kutatói személyi támogatást biztosító rendszer kidolgozása és működtetése országos program” című kiemelt projekt keretei között valósult meg.