FDB preparálás

FDB preparálás

Kontroll C57BL/6 illetve CB1 KO egér hátsó lábainak flexor digitorum brevis (FDB) izmát az állatok túlaltatása és cervikális diszlokációja után kipreparáljuk, majd 0,2%-os I. típusú kollagenázt tartalmazó oldatban 37 °C-on 60 percig emésztjük. Emésztés után az izmokat 4 °C-ra tesszük overnight, majd másnap pipettával történő óvatos triturálással egyedi izomrostokat izolálunk. Az izomrostokat lamininnel borított fedőlemezre szélesztjük a jobb kitapadás érdekében.

Minden kísérletet a Debreceni Egyetem Munkahelyi Állatkísérleti Bizottság felügyelete mellett az Európai Közösség (86/609/EEC) intézményének irányelvei alapján folytatunk.

 

Egér hátsó lába, feltárva az FDB izom kiszedéséhez (felső panel) és a kollagenázos emésztés után izolált egyedi izomrost (alsó panel), amin a méréseket végezzük.

A kutatás az Európai Unió és Magyarország támogatásával, az Európai Szociális Alap társfinanszírozásával a TÁMOP 4.2.4.A/2-11-1-2012-0001 azonosító számú „Nemzeti Kiválóság Program – Hazai hallgatói, illetve kutatói személyi támogatást biztosító rendszer kidolgozása és működtetése országos program” című kiemelt projekt keretei között valósult meg.

In vitro erőmérés

In vitro erőmérés

Az izomerő specifikusabb vizsgálatához izolált izomrostokon végzünk erőméréseket, elektromos ingerlés hatására. E mérések során ki tudjuk küszöbölni az olyan viselkedési és idegrendszeri eredetű hatásokat, amelyek az élő állatokkal végzett kísérletekben befolyásolhatják a kapott eredményt.

Kontroll és CB1 KO egerek hátsó lábaiból lassú típusú soleus és gyors típusú extensor digitorum longus (EDL) izmokat preparálunk, majd oxigenizált Krebs oldattal folyamatosan perfundált mérőkádba helyezzük, és kapacitív erőmérő berendezéshez rögzítjük őket. Az izmokat platina elektródok segítségével elektromosan stimuláljuk. Az erőválaszokat 2 kHz-en Digidata 1200 A/D kártya használatával digitalizáljuk, az adatok tárolására Axotape szoftvert használunk. Az egyedi izom-összehúzódások kiváltásához mindkét izomtípust 5 V-on ingereljük 2 ms-ig, EDL esetében 0,5 Hz, soleus esetében 0,25 Hz frekvencia mellett. Az egyes izmokat 10 egyedi kontrakció amplitúdójának átlagával jellemezzük. A tetanusz kiváltásához EDL esetében 100 Hz-en 200 ms-ig, soleus vizsgálatakor 50 Hz-en 500 ms-ig ingereljük az izmokat, 0,25 Hz frekvenciájú, 10 db tetanuszt tartalmazó kontrakció-sorozat segítségével. Az összehúzódások vizsgálatát követően az izmok tömegét és átmérőjét is lemérjük.

A mérések során kontroll és CB1-KO egerekből izolált izmokat hasonlítunk össze, valamint a kannabinoid agonista 1 µM WIN 55,212-2 hatását is vizsgáljuk az izomösszehúzódásokra.

 

 

Az erőmérő rendszer felépítése (felső panel) és a mérőkarhoz rögzített soleus izom (alsó panel)

A kutatás az Európai Unió és Magyarország támogatásával, az Európai Szociális Alap társfinanszírozásával a TÁMOP 4.2.4.A/2-11-1-2012-0001 azonosító számú „Nemzeti Kiválóság Program – Hazai hallgatói, illetve kutatói személyi támogatást biztosító rendszer kidolgozása és működtetése országos program” című kiemelt projekt keretei között valósult meg.

Függeszkedési teszt

Függeszkedési teszt

A függeszkedési teszttel kontroll és CB1-KO egerek motoros funkcióinak vizsgálatát végezzük. Egy mereven kifeszített madzag közepére tesszük az egeret, megvárjuk, hogy mind a négy lábával megkapaszkodjon, majd elengedjük. Stopperrel mérjük az időt az egér leeséséig. A tesztet minden állattal 5 napon keresztül megismételjük, majd az eredményeket átlagoljuk.

A fenti videónkon egy függeszkedési teszt kísérlet részlete látható. A kísérletek hossza néhány másodperctől 10 percnél is hosszabb ideig változott az egerek izomerejétől függően.

A kutatás az Európai Unió és Magyarország támogatásával, az Európai Szociális Alap társfinanszírozásával a TÁMOP 4.2.4.A/2-11-1-2012-0001 azonosító számú „Nemzeti Kiválóság Program – Hazai hallgatói, illetve kutatói személyi támogatást biztosító rendszer kidolgozása és működtetése országos program” című kiemelt projekt keretei között valósult meg.

Grip-teszt

Grip-teszt

Kontroll C57BL/6 és CB1 KO egereken grip-teszt segítségével mérjük az általuk kifejtett maximális erőt. Ennek során erőmérő rendszerhez egy olyan fémkeretet rögzítünk, amibe az egerek a mellső mancsukkal meg tudnak kapaszkodni, azonban a hátsó végtagjuk nem érint semmilyen felületet. Az egereket a farkuknál fogva gyengén elhúzzuk az eszköztől, és rögzítjük a keret elengedése előtt közvetlenül mérhető maximális erőt. A vizsgálatokat hozzászokatást követően tízszer ismételjük meg minden egyed esetében.

Ezen az általunk készített videón egy grip-teszt kísérlet része látható.

A kutatás az Európai Unió és Magyarország támogatásával, az Európai Szociális Alap társfinanszírozásával a TÁMOP 4.2.4.A/2-11-1-2012-0001 azonosító számú „Nemzeti Kiválóság Program – Hazai hallgatói, illetve kutatói személyi támogatást biztosító rendszer kidolgozása és működtetése országos program” című kiemelt projekt keretei között valósult meg.