2014. december 3., szerda

Egyedi sejteken történő fluoreszcens, intracelluláris [Ca2+]-mérés



Egyedi sejteken történő fluoreszcens, intracelluláris [Ca2+]-mérés

A C2C12 sejtek ill. FDB izomrostok intracelluláris [Ca2+] változásait Fura-2-AM fluoreszcens Ca2+-kötő festék segítségével mérjük. A feltöltést 37 °C-on, termosztátban, 60 percen át végezzük. A sejtekbe juttatott festék 340 és 380 nm hullámhosszúságok között váltakozó gerjesztését a Photon Technology International (PTI) Delta ScanTM kettős monokromátoros berendezés biztosítja. A Fura-2 által kibocsátott fluoreszcens fényt 510 nm-en interferenciaszűrő közbeiktatásával egy fotoelektron-sokszorozó (PMT) segítségével detektáljuk. A két hullámhosszon történő gerjesztés során mért fluoreszcencia-értékek hányadosából (R=F340/F380) az alábbi egyenlet alapján számítjuk ki az intracelluláris [Ca2+]-t: [Ca2+]i=KD∙β∙(R-Rmin)/(Rmax-R). A sejteket illetve izomrostokat folyamatosan perfundáljuk normál Tyrode-oldattal egy külső perfúziós rendszer segítségével, és a különböző mérőoldatokat egy lokálperfúziós rendszeren keresztül adagoljuk közvetlenül a vizsgálni kívánt sejtekre.



A PTI Delta Scan mérőrendszer felépítése. A sejtekben lévő Ca2+-érzékeny festéket 340 és 380 nm hullámhosszon gerjesztjük, majd az emissziót 510 nm-en detektálva, a hányadosukból az intracelluláris Ca2+-koncentráció kiszámítható.



A kutatás az Európai Unió és Magyarország támogatásával, az Európai Szociális Alap társfinanszírozásával a TÁMOP 4.2.4.A/2-11-1-2012-0001 azonosító számú „Nemzeti Kiválóság Program – Hazai hallgatói, illetve kutatói személyi támogatást biztosító rendszer kidolgozása és működtetése országos program” című kiemelt projekt keretei között valósult meg.

Nincsenek megjegyzések:

Megjegyzés küldése