Egyedi sejteken történő fluoreszcens, intracelluláris [Ca2+]-mérés

Egyedi sejteken történő fluoreszcens, intracelluláris [Ca²⁺]-mérés

A C2C12 sejtek ill. FDB izomrostok intracelluláris [Ca²⁺] változásait Fura-2-AM fluoreszcens Ca²⁺-kötő festék segítségével mérjük. A feltöltést 37 °C-on, termosztátban, 60 percen át végezzük. A sejtekbe juttatott festék 340 és 380 nm hullámhosszúságok között váltakozó gerjesztését a Photon Technology International (PTI) Delta Scan^TM kettős monokromátoros berendezés biztosítja. A Fura-2 által kibocsátott fluoreszcens fényt 510 nm-en interferenciaszűrő közbeiktatásával egy fotoelektron-sokszorozó (PMT) segítségével detektáljuk. A két hullámhosszon történő gerjesztés során mért fluoreszcencia-értékek hányadosából (R=F₃₄₀/F₃₈₀) az alábbi egyenlet alapján számítjuk ki az intracelluláris [Ca²⁺]-t: [Ca²⁺]_i=K_D∙β∙(R-R_min)/(R_max-R). A sejteket illetve izomrostokat folyamatosan perfundáljuk normál Tyrode-oldattal egy külső perfúziós rendszer segítségével, és a különböző mérőoldatokat egy lokálperfúziós rendszeren keresztül adagoljuk közvetlenül a vizsgálni kívánt sejtekre.

A PTI Delta Scan mérőrendszer felépítése. A sejtekben lévő Ca²⁺-érzékeny festéket 340 és 380 nm hullámhosszon gerjesztjük, majd az emissziót 510 nm-en detektálva, a hányadosukból az intracelluláris Ca²⁺-koncentráció kiszámítható.

A kutatás az Európai Unió és Magyarország támogatásával, az Európai Szociális Alap társfinanszírozásával a TÁMOP 4.2.4.A/2-11-1-2012-0001 azonosító számú „Nemzeti Kiválóság Program – Hazai hallgatói, illetve kutatói személyi támogatást biztosító rendszer kidolgozása és működtetése országos program” című kiemelt projekt keretei között valósult meg.