Konfokális mikroszkópia

Konfokális mikroszkópia

Kísérleteink során a Zeiss LSM 510 META ill. LSM 5 Live konfokális mikroszkópokat line-scan üzemmódban használjuk. A Rhod-2 Ca²⁺-kötő festékkel feltöltött FDB izomrostokról felvett kétdimenziós x-y képen egy, a rost hossztengelyével párhuzamos vonalat húzunk számítógépes program segítségével. A konfokális mikroszkóp lézere ezután ezen a vonalon pásztázik az általunk megadott paraméterek szerint. Az így kapott kép az adott vonalon a mérés alatt végbement fluoreszcenciaintenzitás-változást mutatja be az idő függvényében. A felvételek fluoreszcenciáját (F) az alap fluoreszcenciára (F₀; a sejtek nyugalmi fluoreszcencia-intenzitása a tranziensek előtt) normalizáljuk, majd a tranziensek amplitúdóját deltaF/F₀-ként határozzuk meg. A line-scan üzemmódban készített felvételeket az izomrostok elektromos ingerlésével kiváltott Ca²⁺-tranziensek rögzítésére használjuk.

 

Az ábra bal oldalán egy L6 myoblast tenyészet x-y képe látható, a sárga vonal jelöli a line-scan mérés helyét. A mérés során a mikroszkóp lézere csak ezen a vonalon pásztázik, és rögzíti a fluoreszcencia-intenzitás változását az idő függvényében. A jobb oldalon látható a kész line-scan kép, aminek a függőleges tengelye mutatja a sárgával jelölt vonal egyes pixeleinek a fluoreszcencia intenzitását az adott időpillanatban, a vízszintes tengelye pedig ennek a megváltozását az idő függvényében.

A kutatás az Európai Unió és Magyarország támogatásával, az Európai Szociális Alap társfinanszírozásával a TÁMOP 4.2.4.A/2-11-1-2012-0001 azonosító számú „Nemzeti Kiválóság Program – Hazai hallgatói, illetve kutatói személyi támogatást biztosító rendszer kidolgozása és működtetése országos program” című kiemelt projekt keretei között valósult meg.